在细菌生长代谢过程中PE的生长方式

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考虑到细菌生长和产毒的营养要求不同，将培养基分为生长培养基和产毒培养基两种，并对培养基成分作了如下改进：加入葡萄糖增加碳源和能量，促进细菌生长；产毒培养基中加大甘油量至2.0%，促进PE基因转录；加入NTA抑制胞外蛋白酶活性；硫酸亚铁浓度保持在1mmolL，既有利于细菌生长，又不致于影响毒素的产生。培养条件方面，小瓶培养振荡次数从120rmin提高到180rmin，大瓶培养通气量维持在30～40Lmin，以提高培养基含氧量，这些改进为高水平毒素的形成提供了物质基础。　　PE在细菌生长代谢过程中形成，细菌生长活跃是毒素合成量提高的必要条件，因此，我们采用两步法活跃种子，并对菌龄和接种菌量进行了比较.一代种子菌龄对绿脓杆菌生长的影响：比较一代种子17h和24h菌龄对二代种子增殖的影响发现，菌龄对二代种子菌量的影响无差异，但17h菌龄迟缓期较短，培育6h已达到对数生长末期，步入稳定期.种子活化以细菌达到对数生长末期为最佳，所以我们选用17h肉汤琼脂斜面培养物作为第一代种子，6h培养物为二代种子.　　二代种子接种量对产毒的影响：在50ml产毒培养基中分别接种0.1ml、1ml、10ml二代种子，观察产毒培养基中细菌生长和PE形成情况，结果显示，0.1ml接种量组细菌生长迟缓且量少，1ml和10ml接种量两个组相平行，10ml组培养物中菌浓度高于1ml组，从接种量对以后产毒影响来看，1ml接种量组比10ml接种量组产毒稳定，所以我们选用每50ml产毒培基1ml种子的接种量。